干货|你的细胞准备好了吗?(冻存篇)

细胞冻存是目前细胞培养中最常见的细胞保存方式。将细胞消化后放置在细胞冻存液中,通过程序降温盒放置在-80℃超低温冰箱中过夜后放置在-196℃液氮中冻存,可以让细胞停止生长从而起到保存细胞特性的效果,再假期结束后再重新复苏用于实验,也可以在培养到一定代次后长期冻存一定数量的细胞,保证后续细胞留种。

细胞冻存一般是我们实验的最后一步,但是越到最后一步我们越不能掉以轻心,如果冻存步骤出现失误就会影响到下一代细胞实验的整体效果,甚至导致细胞提前老化死亡。

那接下来我们就开始好好了解一下细胞冻存这件事儿吧!

液氮保存细胞的原理

细胞是构成生命体的基本结构和功能单位,所以细胞会不断代谢,代谢过程需要有各类蛋白酶参与,当低于-70℃时蛋白酶就会停止工作,从而通过超低温贮存就可以使细胞们停止代谢活动,进入休眠状态,以便于长期保存。

在细胞冻融中产生的冰晶会对细胞造成损伤,所以我们需要在冻存时加入我们的细胞冻存液(BC-CFM-01-100ML),用科学的力量尽可能的保护我们的细胞。

细胞冻存液(BC-CFM-01-100ML)

细胞需要“慢冻快融”。在细胞冻存时我们需要尽可能地保证细胞的程序降温。目前常见的操作方法一般分为手动降温和程序降温两种。

手动降温方法:将细胞冻存管妥善放置在4℃存放30min后放置在-20℃存放60min再次将冻存管存放在-80℃冰箱中过夜,次日移入-178℃液氮中保存。

程序降温方法:将细胞冻存管放置在容器中,其中填充满异丙醇,直接放置在-80℃超低温冰箱中,从而可以保证其内部能够以-1℃/min的速度进行程序降温至-80℃,然后转移至-178℃液氮中储存。

程序降温盒可以保证每个梯度的匀速降温,相较于手动降温可以更加便捷并且更加精准,如果细胞较脆弱或是较珍贵时建议使用程序降温盒降温。

TIPS

干货|你的细胞准备好了吗?(冻存篇)

注意事项:

1. 全程需严格无菌操作;

2. 细胞较脆弱,吹打细胞过程需轻柔;

3. 每次移液后需要更换枪头,避免造成溶液交叉污染;

4. 胰酶消化时间久会加速细胞老化,需严格控制消化时间;

5. 操作液氮时需要做好完全防护措施,避免直接接触到液氮造成伤害;

6. 细胞冻存液在常温下具有毒性,细胞冻存管配置好后需要尽快移入冰箱。


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